Каким бывает и как проводится тест на коронавирус

Альтернатива ПЦР-диагностике

В любом случае нужно повышать чувствительность тест-систем на основе ПЦР, заключает Алексей Чемерис, а для этого нужны другие подходы. «Надо сделать так, чтобы ложнонегативных результатов было меньше, практически исключить их», — считает он.

В обзоре, подготовленном вместе с коллегами, профессор Чемерис рассматривает преимущества и недостатки ПЦР-диагностики и других методов амплификации — копировании РНК бетакоронавирусов, к которым относится SARS-CoV-2. Теоретически весьма перспективен метод петлевой амплификации — LAMP, где используют сразу шесть или восемь праймеров.

«С одной стороны, повышается специфичность: только когда все праймеры отожгутся (сработают, распознав РНК коронавируса. — Прим. ред.), начнется амплификация, с другой — вирус мутирует и шансы, что реакция не пойдет, увеличиваются, поскольку какие бы участки генома ни выбрать, все равно вероятность мутаций больше в восьми участках, чем в двух или трех (при использовании гибридизационного зонда), достаточных для ПЦР», — объясняет исследователь.

Во время предшествующей эпидемии SARS возбудителя выявляли с помощью реакции NASBA (амплификации на основе секвенирования нуклеиновых кислот) и RCA (репликации по типу катящегося кольца). Геномный редактор CRISPR-Cas также пробуют применять для идентификации РНК нового коронавируса. Есть работы по полногеномному секвенированию любого генетического материала, находящегося в биоматериале. Метод очень чувствительный, но дорогой и долгий — занимает 20 часов. Так что в ближайшее время ПЦР с обратной транскрипцией останется самым массовым способом обнаружения коронавируса в организме.

Спасут ли мир тесты на антиген

Тесты, которые обнаруживают антигены коронавируса (белки на его поверхности), существенно оперативнее: результат можно получить в течение 5-15 минут. Для их проведения берут мазок из носа или с задней стенки глотки.

Чувствительность и специфичность

Тесты на антиген высокой специфичностью: согласно американским Центрам по контролю и профилактике заболеваний (CDC), она стремится к 100%. Это значит, что к положительным результатам этого теста можно относиться с доверием, ложноположительные результаты редки. Но его чувствительность колеблется от 84% до 97,6%, то есть, ниже, чем у ПЦР-теста. Чем ниже чувствительность, тем выше риск ложноотрицательного результата. Американское Управление по контролю за пищевыми продуктами и лекарственными средствами (FDA) рекомендует проверять отрицательные результаты антиген-тестов у людей с симптомами COVID-19 при помощи ПЦР-теста.

Экспресс-тесты на антиген недавно получили плохую прессу. Wall Street Journal в заголовке статьи связал их со вспышкой COVID-19 после приема в Розовом Саду Белого дома. Одним из заболевших оказался президент США Дональд Трамп. Сообщалось, что участники проходили экспресс-анализ при помощи тест-системы BinaxNOW компании Abbot непосредственно перед мероприятием.

У антиген-тестов есть несомненные достоинства. Для них не требуется специальной лаборатории, они дешевле, чем ПЦР. Их можно использовать непосредственно у постели большого (например, в приемном отделении или дома). Потенциально их можно применять в учебных учреждениях и на различных мероприятиях.

Антиген-тест – еще не «тест мечты»

Высокий риск ложноотрицательного результата и необходимость проверки – не все недостатки антиген-теста. Есть и другие причины, по которым существующие тестовые платформы не подходят на роль «народного» теста, который можно быстро провести дома перед выходом на работу.

• Имеющиеся антиген-тесты – не для самостоятельного использования. Для их проведения все равно нужен медработник.
• Они недостаточно дешевые для частого применения. Тестовый набор Abbott стоит 5 долларов, Quidel – 23 доллара. Тестовая платформа компании Beckton Dickinson требует специальный анализатор, который стоит 250-300 долларов. В Москве проведение теста в лаборатории может обойтись примерно в 3 тысячи рублей.
• Неизвестна надежность существующих антиген-тестов при бессимптомном течении COVID-19. В последнем обзоре Кокрейновского содружества такие данные полностью отсутствуют. В настоящее время FDA рекомендует проводить антиген-тесты только людям с симптомами. Например, «прославленный» тест производства Abbott предназначен для использования в течение первой недели болезни.

JAMA приводит пример неудачи использования антиген-теста в домах престарелых в Неваде. Половина положительных тестов, перепроверенных при помощи ПЦР, оказались ложно положительными.

Платные анализы на коронавирус на дому

Какими методами проводят тест?

Важно использовать правильную методику для определения наличия или отсутствия ковида в организме. Разработано 2 основных методики, которые отличаются высокой специфичностью

Проводят следующие исследования:

• ПЦР — молекулу covid-19 многократно удваивают, чтобы распознать генетический материал;
• ИФА — распознает комплекс антиген-антитело, выявляет не сам возбудитель, а иммунную реакцию, направленную против его действия.

Анализ можно выполнять в домашних условиях и лаборатории. Чтобы применить его дома, покупают специфические тест-системы. В набор входит скарификатор, при помощи которого делают небольшое отверстие в подушечке пальца.

Выделенную кровь капают в первое окошко на тесте. Во второе помещают реагент из набора (контрольный образец). Благодаря анализу получают данные:

• наличие иммуноглобулинов M — острая стадия заболевания, когда коронавирус находится в организме;

• иммуноглобулины G — иммунологические клетки памяти, защищающие от повторного заражения (вирус ранее был у человека, сформировался иммунитет);
• отрицательно — отсутствуют иммуноглобулины обоих типов, пациент не был заражен covid-19 последние 2-3 месяца.

Экспресс-тесты используют на основе анализа ИФА. Более достоверным методом считается ПЦР. Но он обнаруживает только острую стадию болезни и весь период содержания ковида в крови. Если нужно определить антитела, применим ИФА.

Кому нужно делать тест на коронавирус

Обязательный бесплатный тест на коронавирус делается всем, кто обратился за медицинской помощью по симптомам этой инфекции и кто вернулся из-за границы в течение последних 14 дней.

Также тесты на коронавирус в России делают:

• тем, кто вернулся в Россию из другой страны и имеет признаки респираторных заболеваний;
• тем, кто контактировал с заболевшим COVID-19;
• больным с диагнозом «внебольничная пневмония»;
• лицам старше 65 лет, обратившихся за медпомощью с симптомами;
• медработникам из группы риска – 1 раз в неделю, при появлении симптомов – немедленно;
• находящимся в учреждениях постоянного пребывания (кадетские корпуса, учреждения ФСИН, дома-интернаты) и персонал таких организаций – при появлении симптомов.

У госпитализированных пациентов с подтвержденной COVID-19 инфекцией осуществляется повторный забор образцов из верхних дыхательных путей и нижних дыхательных путей с целью выявления/демонстрации вирусного клиренса (скорости очищения биологических жидкостей или тканей организма).

Частота сбора образцов будет зависеть от местных эпидемических характеристик и наличия ресурсов. Для выписки из больницы у клинически выздоровевшего пациента рекомендуется получить два отрицательных результата теста с интервалом не менее 24 часов.

Если вы самостоятельно решили провериться, то помните, что тест имеет смысл проводить при явном подозрении на коронавирус, то есть когда у вас есть симптомы.

Понапрасну не подвергайте себя риску заболеть, стоя в очереди потенциально инфицированных людей, которые пришли в лабораторию. Есть тесты на коронавирус на дому:  их привозят медработники (например, специалисты Центра молекулярной диагностики Роспотребнадзора), вы сами берете мазок из зева, потом они забирают пробирки и увозят в лабораторию на исследование.

В России платный анализ на коронавирус сдается по предварительной записи, строго по паспорту, делают его только лаборатории с правом проведения таких видов тестирования.

В случае положительного результата о нем сообщают в Роспотребнадзор. В Роспотребнадзоре результат перепроверят, при этом повторно вам туда приходить не нужно, они возьмут из лаборатории образцы биологического материала.

В случае очередного положительного результата уже из Роспотребнадзора связываются с пациентом. В Москве планируется создать единую электронную базу данных, в которой будут занесены все данные тестирования на коронавирус. А также включать проведение анализа на коронавирус в России в программу обязательного медицинского страхования (ОМС).

Экспресс-тесты на антитела

Это тест-полоски, которые покажут, болел или не болел человек коронавирусом раньше и болеет или нет сейчас. На первый вопрос отвечают иммуноглобулины G, на второй — иммуноглобулины М.

Где сдать экспресс-тест на антитела к коронавирусу:

• «Рассвет». Столярный пер., 3, корп. 2. Цена 4800 руб.
• «Чайка». Цена 4800 руб.
• Hadassah Medical Moscow. Инновационный центр «Сколково», Большой бул., 46, стр. 1. Цена 5300 руб
• «Медицина». Цена от 5 900 руб.
• GMS Clinic. 1-й Николощеповский пер., 6, стр. 1. Цена 5990 руб.
• Европейский медицинский центр. Ул. Щепкина, 35; Спиридоньевский пер., 5, стр. 1; Трифоновская ул., 26. Цена €90 (оплата в рублях).

Лаборатория ДНКОМ проводит тесты на антитела бесплатно в рамках научного исследования. Заполнить анкету, чтобы стать участником, можно здесь.

К старту тестирования в середине мая готовится сеть лабораторий «Инвитро».

Что такое ПЦР тест

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) используется для идентификации возбудителя инфекции путем сравнения ДНК искомого микроорганизма с эталонной ДНК в исследуемой пробе.

Методы тестирования

ПЦР тесты относятся к категории экспресс тестов и имеют ориентировочное значение и не являются окончательным диагнозом. Тест выявляет минимальное количество нуклеиновых кислот (РНК) патогенного возбудителя в различных биологических жидкостях и клеточных элементах. В каждом из множества циклов теста происходит амплификация РНК и любые мельчайшие частицы превращаются в ДНК цепочки.

Амплификация — процесс образования дополнительных копий участков хромосомной ДНК, как правило, содержащих определённые гены либо сегменты структурного гетерохроматина. Википедия

А ошибки бывают?

Метод ПЦР обладает очень высокой чувствительностью, позволяет найти и распознать даже единичные фрагменты вирусных частиц. Это наиболее точный анализ среди всех возможных способов обнаружить вирус.

Ложноотрицательные ответы теста возможны в случае, если неудачно взят мазок и вирусные частицы в него не попали. Например, вы уже выздоравливаете и выделяете очень мало вируса или заразились совсем недавно.

Есть мнение, что у людей с пневмонией, вызванной COVID-19, тест будет отрицательным, так как вирус «спустился» в легкие и в мазках не обнаруживается. Однако это маловероятно. При пневмонии болезнетворные частицы продолжают выделяться через нос и рот в составе мокроты, слущенного эпителия и других выделений. Именно по этой причине легочные формы многих заболеваний очень заразны, например, туберкулез легких.

Ложноположительные ответы теста возможны при нарушении правил забора материала. Так бывает, если в материал анализа вирусные частицы попали из посторонних источников. Например, когда медперсонал обрезает зонды тест систем от всех пациентов одними ножницами или неаккуратно обламывает их руками в одних и тех же перчатках, без использования санитайзеров.

Идеальные условия забора мазков возможны только в специальном кабинете клиники, где строго контролируются все этапы тестирования. Если вы делаете тест на дому или из окна автомобиля — никто не даст вам гарантий точности и надежности.

Факт! ПЦР анализ на COVID-19 выявляет в мазках фрагменты вируса, но не показывает, какой это вирус: живой и активный, способный вызвать болезнь, или уже ослабленный иммунной системой и даже убитый. Поэтому утверждать наверняка, что человек с положительным ПЦР заразен — нельзя. Хотя для подстраховки, именно так и считается: пока анализы положительные, вам придется соблюдать строгий карантин.

Клиника «Медси»

В клинике «Медси» получить результат о наличии или отсутствии у пациента коронавирусной инфекции можно по прошествии 3 дней с момента забора биоматериала. По утверждениям экспертов организации, лучше время для взятия мазка – утро, когда человек только проснулся. Однако, не всегда удается пройти анализ именно в это время, поэтому клиника рекомендует следующее:

• За 3-4 часа до анализа нельзя пить, есть, курить, чистить зубы или полоскать полость рта.
• При прохождении терапии исключить прием препаратов за 6 часов до процедуры.
• Не использовать пастилки для свежего дыхания перед непосредственным забором мазка.

Стоимость анализа при самостоятельном посещении клиники – 3 000 рублей. Стоимость выезда на дом сообщается только по телефону, указанному ниже.

Подробности об услуге на официальном сайте клиники. Оформить заявку на вызов специалиста на дом можно по телефону +7 (495) 152-47-53. Колл-центр клиники сообщит подробности о приезде и стоимости услуги по телефону.

Где и как сдают тест на коронавирус

Очевидный вариант — сдавать тест на коронавирусную инфекцию в лаборатории или клинике.

Плюсы: высокое качество забора материала на ПЦР и оптимальная цена. Большинство ошибок при тестировании на коронавирус случаются из-за неправильного забора биологического материала. Если забор делает сам пациент, качество соскоба может быть ощутимо ниже и, как следствие, вас может ждать ложный результат анализа.

Минусы: необходимо находиться в одном помещении с другими потенциально зараженными людьми, пришедшими на тестирование. Лаборатории и клиники пользуются разметкой для соблюдения социальной дистанции, проводят тестирование только по записи, чтобы контролировать потоки людей, и ограничивают количество тех, кто может находиться в помещении одновременно, но риск столкнуться с инфицированным человеком все же есть.

Клиники и лаборатории, где москвичи без симптомов ОРВИ могут сдать тест на коронавирус методом ПЦР:

• «Хеликс». Цена 1350 руб. Готовность до 3 суток.
• «Семейный доктор». Цена 1950 руб. Готовность 3– 4 дня.
• «Гемотест». Цена 2400 руб. Готовность до 2 суток.
• «СитиЛаб». Цена 2290 руб. Готовность 2–3 дня.
• «Медси». Цена 3000 руб. Готовность до 3 дней.
• Labques. Цена 3395 руб. Готовность 3 дня.
• «Чайка». Цена 4000 руб. Готовность 2–4 дня.
• «Медицина». Цена от 5 900 руб. Готовность 4–7 часов.
• Eвропейский медицинский центр по адресам: ул. Щепкина, 35, и Спиридоньевский пер., 5, стр. 1, Трифоновская ул., 26. Цена €132 (оплата в рублях). Готовность до 5 дней.

«Они не все плохие, просто можно нарваться»

— То, что тесты есть в продаже как в сети Интернет, так и в аптеках, мы однозначно в курсе, — сообщила нашему изданию Лейла Фазлеева. — В целом в России зарегистрированы и разрешены к применению 84 экспресс-тест-системы для определения антител к новой коронавирусной инфекции. Факт регистрации подтверждает то, что данная продукция разрешена к применению. Цены на них не подлежат государственному регулированию. Их формирование осуществляется в зависимости от отпускных цен производителей, отпускных цен организаций оптовой торговли, даты поставки, объема закупок.

Более категорично о стоимости, а также о качестве экспресс-тестов на коронавирус высказался директор научно-клинического центра прецизионной и регенеративной медицины КФУ.

— Что касается цен, то они устанавливаются «от балды». Если говорить о качестве, то в начале пандемии Европа вернула несколько китайских партий из-за низкого качества. Это не значит, что они все плохие, просто можно нарваться на всякое

Важно понимать, есть у этих тестов регистрационные удостоверения или нет, поскольку это тоже определенная проверка, — резюмировал Альберт Ризванов

Лина Саримова

ОбществоМедицина Фазлеева Лейла РинатовнаРизванов Альберт Анатольевич

Как сделать экспресс-тест на коронавирус?

Тесты на выявление антител IgM и IgG позволяют определить их по капле крови пациента. При этом не требуется специального этапа подготовки, никаких противопоказаний к проведению анализа нет.

Инструкция техники проведения экспресс-теста на антитела к Covid-19 дома:

1. Хорошо обработайте палец спиртовым раствором, раствор на пальце должен полностью высохнуть.

1. С помощью специального устройства сделайте прокол в области подушечки кончика пальца (2-3 мм от выпуклой части).

1. С помощью пипетки соберите 1 каплю крови.

1. Добавьте каплю крови в пробирку с реагентом.

1. Закройте пробирку и в течении 3 сек. потрясите.

1. Пипеткой наберите полученный раствор.

1. Добавьте раствор на тест окно и ждите результат в течении 10-15 минут.

Когда проявятся полоски, зафиксируйте результат, так как через 30 минут он может исчезнуть.

Российский производитель экспресс-тестов утверждает, что чувствительность выявления антител к коронавирусу будет сопоставима с точностью диагностики методом ИФА.

Риск ложных результатов

Ложные результаты могут появиться как от сдачи крови, так и мокроты. Это повышает риск распространения инфекции среди населения, поэтому требуется соблюдать все правила, чтобы подобный результат не возник. Ложные результаты возникают в следующих случаях:

• неправильный забор биологической жидкости или проведение анализа (врачебная ошибка);
• определение вируса по капиллярной крови в первые дни болезни (обычно проводится при помощи экспресс-теста);

• проведение тестирования в инкубационный период, когда заражение произошло, но вирус еще активно не размножился;

• неправильный забор мокроты, например, при сборе слизи в наружной части носа или полости рта (наиболее достоверные анализы получают при глубоком заборе или бронхоскопии);
• неправильное проведение теста в условиях лаборатории (ИФА, ПЦР для мокроты и крови из вены) или экспресс-метода (капиллярная кровь) в домашних условиях;
• выполнение методики не по назначению, например, проведение ПЦР для обнаружения антител (применим только метод ИФА).

Так как часто встречаются ложноотрицательные результаты, при подозрении на коронавирусную инфекцию рекомендуется выполнять 2 анализа с разницей в 3-5 дней. Даже если человек только заразился, через указанное время инкубационный период завершается, начнутся первые симптомы болезни или активное размножение вируса в случае бессимптомной форме. Поэтому повторный тест покажет достоверные данные.

ПЦР на ковид, как подготовиться к сдаче

Важно понимать, что точность результата анализа на ковид методом ПЦР зависит от множества параметров. В каждом цикле цепной реакции чувствительность может быть разная

ПЦР определяет не наличие или отсутствие ДНК коронавируса, а количество этой ДНК в отобранных пробах. Если за разумное количество циклов ДНК не определена, тест будет отрицательным. Если на последних циклах есть амплификация, но она ниже, установленного для положительного результата, значения, то результат теста также будет отрицательным.

Для объективного результата, перед отбором проб, нужно соблюсти следующие условия.

• не полоскать горло непосредственно перед взятием мазка
• не пить за 2-3 часа
• не орошать зев менее чем за 2 суток до взятия проб
• за 10-14 дней до взятия мазка на ковид перестать капать гриппферон и не принимать другие интерфероны

При несоблюдении этих условий ПЦР диагностика будет не качественной и не отразит реальную картину.

Сколько коронавируса нужно, чтобы заразиться, и о чем говорит вирусная нагрузка при COVID-19

Вирусологи Сима Лакдавала и Марта Галья, специализирующиеся на гриппе, написали для Discover Magazine об инфицирующей дозе SARS-CoV-2 и о том, зависит ли тяжесть COVID-19 от количества вирусных частиц в организме. Увы, на оба вопроса пока нет хотя бы приблизительных ответов.

Инфицирующая доза — это сколько вируса надо, чтобы заразиться. Для гриппа она составляет всего десять частиц. Для SARS-CoV-2 эта доза неизвестна, а его высокая заразность может быть обусловлена как низкой дозой, так и большим количеством частиц, которые вырываются изо рта. Также неясно, зависит ли тяжесть болезни от полученной дозы.

Вирусная нагрузка — это количество вируса в образце для анализа. У больных COVID-19 в тяжелом состоянии она в среднем выше, но у некоторых людей с легкими симптомами вирусная нагрузка тоже бывает высокая. Как правило, чем выше нагрузка, тем больше вирусных частиц распространяет зараженный, тем проще ему инфицировать других. В случае с SARS-CoV-2 этот показатель обычно выше тогда, когда человеку ставят диагноз, то есть в начале болезни.

Авторы делают вывод, что лучше вообще избегать контакта с вирусом: сидеть дома, сторониться людей и носить маску (не столько чтобы защититься самому, сколько чтобы не заразить других, ведь отсутствие симптомов не гарантирует, что вы не заразны).

Метод ПЦР

ПЦР — это метод полимеразной цепной реакции. О нем наслышаны многие, хотя до эпидемии значение аббревиатуры ПЦР было знакомо лишь криминалистам, генетикам, а также лабораторным работникам, определяющим ВИЧ, сифилис, гепатиты, туберкулез и еще ряд заболеваний.

Как работает ПЦР и какие бывают вирусы

ДНК — это двойная спираль, кодирующая генетическую информацию, в том числе, вирусов. Обе части ДНК соединены по принципу комплементарности. То есть, один элемент может соединяться только с соответствующим ему. Например, гуанин (G) только с цитозином(C). ДНК-содержащие вирусы — это вирус герпеса, оспы, гепатита В. Коронавирус относится к РНК-содержащим вирусам.

Для исследования методом ПЦР берется мазок из ротоглотки. Если в материал для анализа попала вирусная частица, то в лаборатории одна нить ее РНК достраивается до двойной спирали ДНК.

РИА Новости/Сергей Пивоваров

В чем суть метода ПЦР?

Вместо того, чтобы искать иголку в стоге сена (одну нить вирусной частицы), можно сделать целый «клубок» нитей, найти которые не составит труда. Нуклеотидная последовательность («буквы») РНК вируса уже расшифрована. И к этим «буквам» по принципу комплиментарности присоединяются в результате химической реакции другие. В итоге получается молекула ДНК. Она служит матрицей. Затем ее многократно размножают примерно по той же технологии. ДНК помещают в раствор со специальным набором химических веществ в устройство-амплификатор, в котором периодически меняется температура от 50 до 92 градусов. В нем, как в ксероксе, ДНК копируется.

Финальный этап исследования – электрофорез, на нем можно увидеть размноженные копии ДНК. ДНК заряжена отрицательно, и в электрическом поле ее притягивает положительный заряд. Притягиваясь к нему, размноженная ДНК проходит через краситель. Чем больше фрагмент ДНК, тем медленнее он двигается и тем ярче окрашивается.

Если в биоматериале пациента не было вирусной частицы, то и первая цепочка ДНК не выстроится – химическим веществам, подобранным для строительства, не за что будет «зацепиться». Соответственно, форез ничего не покажет.

На антиген-тесты возлагают надежды

«Мы считаем, что у тестов на антиген самый высокий потенциал для скрининга бессимптомных людей», — считает Мара Аспинолл (Mara Aspinall), создатель программы биомедицинской диагностики в Университете штата Аризона. Она сообщила JAMA, что сейчас два десятка компаний работают над простым и быстрым тестом на SARS-CoV-2, который по простоте можно будет сравнить с тестом на беременность.

«Мы берем современную лабораторию и сжимаем ее до размера покрытой пластиком полоски», — сказал JAMA Бобби Брук (Bobby Brooke) основатель E25Bio, одной из компаний, которые принимают участие в гонке за простым тестом.

Могут ли симптомы отсутствовать полностью